??????? 本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完美的協(xié)議適合每一種分離目的。因此，建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測試，您將輕松純化您正在尋找的組件。
??????? 一、快速液相色譜純化
??????? 使用快速色譜法進行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱使用更大的粒徑和柱容量，允許使用更多的起始材料，但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度，或者如果下一步將進行 HPLC，這可能是您的選擇。
??????? 1、確定溶劑系統(tǒng)
??????? 樣品的純度（即混合物中有多少化合物）可以使用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對極性進行定性測定。使用 TLC 預(yù)先篩選最佳流動相和固定相將節(jié)省時間和金錢。根據(jù)所使用的溶劑，您可能需要在通風(fēng)柜中運行色譜柱，因為存在潛在的危險煙霧。
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??????? 2、確定要使用的列
??????? 選擇分離柱時要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說，快速液相色譜柱的最大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱，但如果您沒有那么多起始材料，那么您只會在硅膠和額外的溶劑上浪費金錢來運行這些大型色譜柱。在確定液相分析柱、基質(zhì)和溶劑后，您就可以進行快速分離了。
??????? 3、液相色譜柱
??????? 無論您是自己裝柱還是購買一根預(yù)裝柱，按重量計算硅膠與化合物的比例（即硅膠：化合物）都將幫助您實現(xiàn)更有效的分離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱，像uHPLCs高效液相C18-AQ分析柱對親水性和極性化合物具有更強的保留能力和選擇性。
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??????? 如果包含了分離不太復(fù)雜的溶液需要 30:1 到 50:1 的比率，但更復(fù)雜的分離可能需要高達 120:1 的比率。手動運行色譜柱時，切勿讓溶劑管線低于硅膠，否則氣孔會在硅膠上形成看起來像裂縫的長線。這大大降低了分離的效率。
???????? 二、HPLC純化
?????? 在 HPLC 上運行樣品相當簡單，因為在快速液相色譜柱上預(yù)純化過程中確定的許多參數(shù)都可以應(yīng)用于此過程。如果您在沒有預(yù)純化步驟的情況下運行 HPLC 分離，請考慮使用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 方法。使用 HPLC 時的另一個考慮因素是計算的背壓。由于 HPLC 色譜柱的粒徑更小，可實現(xiàn)更高質(zhì)量的分離，因此這些系統(tǒng)往往在高壓條件下運行，而閃蒸分離的壓力相對較低。使用有關(guān)粒徑和形狀、色譜柱內(nèi)徑和溶劑規(guī)格的信息計算估計的背壓。
??????? 最后，與恒譜生技術(shù)支持專家進行簡短討論可以節(jié)省您寶貴的時間，并使您能夠在瞬間分離化合物！
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發(fā)布于: 2022-04-08