如何選擇合適的保護(hù)柱來(lái)匹配色譜柱？
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一、選擇保護(hù)柱的原則
1、填料類型：
保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱的填料具有相似的化學(xué)性質(zhì)和分離機(jī)制。例如，反相色譜柱通常搭配反相保護(hù)柱，如C18、C8等;正相色譜柱則需選擇正相保護(hù)柱，如硅膠等填料。
一般情況下，選擇與分析柱相同的填料類型是最佳選擇。
2、柱尺寸：
保護(hù)柱的內(nèi)徑和長(zhǎng)度應(yīng)與分析柱相匹配。一般來(lái)說(shuō)，保護(hù)柱的內(nèi)徑與分析柱相同或略小，長(zhǎng)度通常在20-50mm之間，以確保在不增加過(guò)多柱壓的情況下提供有效的保護(hù)。
保護(hù)柱體積按分析柱體積的5%~10%選擇。例如，對(duì)于4.6×250mm的分析柱，其體積約為4mL，保護(hù)柱體積可選擇在0.2~0.4mL之間為宜。
3、樣品特性：
對(duì)于復(fù)雜樣品，如生物樣品、環(huán)境樣品等，其中可能含有較多的雜質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，應(yīng)選擇具有較強(qiáng)吸附能力和高分辨率的保護(hù)柱，以更好地去除雜質(zhì)，保護(hù)色譜柱。
如果樣品的酸堿度較強(qiáng)，需要選擇耐酸堿性好的保護(hù)柱，如采用特殊處理的不銹鋼柱體或耐酸堿的聚合物材料制成的保護(hù)柱，以防止柱體被腐蝕。
4、分析需求：
如果對(duì)分離度要求較高，需要選擇柱效高、填料粒徑小的保護(hù)柱，以確保在保護(hù)色譜柱的同時(shí)，不會(huì)對(duì)分離效果產(chǎn)生明顯影響。
在高通量分析中，應(yīng)選擇柱壓較低、流通性好的保護(hù)柱，以減少系統(tǒng)壓力，提高分析速度。
二、保護(hù)柱的結(jié)構(gòu)和連接方式
1、結(jié)構(gòu)：
卡套式保護(hù)柱：柱套可反復(fù)使用，柱芯污染后可替換。購(gòu)買時(shí)需要注意柱芯中的填料類型，確保柱芯與柱套匹配，否則可能導(dǎo)致峰型異常或漏液。
直接填裝短柱：這種結(jié)構(gòu)的保護(hù)柱實(shí)質(zhì)就是短的色譜柱，一般填裝的填料與分析柱填料完全一樣。生物樣品分析中，這種類型保護(hù)柱居多，但缺點(diǎn)是一次性使用，污染嚴(yán)重時(shí)，只能報(bào)廢。
2、連接方式：
獨(dú)立式保護(hù)柱：保護(hù)柱和分析柱之間用一段管路連接，不用擔(dān)心與分析柱在連接上的匹配問(wèn)題。但使用管路連接時(shí)，連接不當(dāng)容易產(chǎn)生死體積。
直連式保護(hù)柱：保護(hù)柱接口帶螺紋，可直接與分析柱連接，死體積小，UPLC分析時(shí)建議選擇直連式保護(hù)柱。購(gòu)買時(shí)需保證接口與分析柱匹配。
三、使用保護(hù)柱的注意事項(xiàng)
1、安裝與連接：
獨(dú)立式保護(hù)柱與分析柱連接時(shí)，連接管路應(yīng)盡可能短，且接口切面平滑，以減少死體積，降低柱外展寬效應(yīng)。
卡套式保護(hù)柱一般未標(biāo)注液流方向，使用時(shí)最好自行標(biāo)注，并按照標(biāo)注方向來(lái)使用，以免正反向使用后，截留的雜質(zhì)污染分析柱。
2、維護(hù)與清洗：
保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對(duì)填料表面修飾有影響。
如同一保護(hù)柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保護(hù)柱需先清洗并用流動(dòng)相平衡保護(hù)柱一段時(shí)間后，再接分析柱使用。
3、更換時(shí)機(jī)：
當(dāng)柱壓升高>10%，柱效下降>10%，以及分離度下降>10%時(shí)，這些均是提醒要維護(hù)保護(hù)柱的信號(hào)。
選擇合適的保護(hù)柱來(lái)匹配色譜柱需要綜合考慮多個(gè)因素，包括填料類型、柱尺寸、樣品特性、分析需求、保護(hù)柱的結(jié)構(gòu)和連接方式等。通過(guò)合理選擇和使用保護(hù)柱，可以有效延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
發(fā)布于: 2025-01-10